آميزه مناسبي از اكتينيدين ميوه كيوي و تريپسين براي جداسازي و كشت سلول‌هاي اندوتليال آئورت موش صحرايي

مجله دانشكده پزشكي دانشگاه علوم پزشكي تهران

دوره 68 - شماره 3

نوع مقاله: ---- Unspecified ----
چكيده:

زمينه و هدف: آنزيم‌هاي پروتئوليتيك، خصوصاً كلاژنازها براي هضم ماتريكس خارج سلولي، جداسازي سلول‌ها و كشت اوليه مورد استفاده قرار مي‌گيرند. با توجه به مشكلات تخليص و مقدار كم كلاژنازها در منابع باكتريايي يا جانوري، يافتن منابع جديد و كم هزينه اين آنزيم‌ها اهميت دارد. به‌همين جهت در اين مطالعه اكتينيدين كه فراوان‌ترين پروتيين ميوه كيوي است، تخليص شد و مخلوط مناسبي از آن و تريپسين براي جداسازي سلول‌هاي اندوتليال آئورت موش صحرايي به‌كار رفت.
روش بررسي: سلول‌هاي اندوتليال آئورت با استفاده از محلول هضمي شامل غلظت‌هاي متفاوت اكتينيدين (دو تا 16 ميلي‌گرم در ميلي‌ليتر) و تريپسين (3/0، 6/0، 2/1 و 4/2 ميلي‌گرم در ميلي‌ليتر) در زمان‌هاي مختلف (15 تا 90 دقيقه) جدا شدند و در محيط كشت DMEM كشت داده شدند. سلول‌هاي جداشده به‌واسطه خصوصيات مورفولوژيك و رنگ‌آميزي ايمونوسيتوشيمي شناسايي شدند و درصد بقا به‌كمك آزمون تريپان بلو تخمين زده شد.
يافته‌ها: اكتينيدين در غلظت 10 ميلي‌گرم در ميلي‌ليتر به‌همراه تريپسين با غلظت 2/1 ميلي‌گرم در ميلي‌ليتر به‌مدت 60 دقيقه توانست سلول‌هاي اندوتليال آئورت موش صحرايي را جدا كند. درصد بقاي سلول‌هاي ذكر شده در اين شرايط 90% تخمين زده شد. خصوصيات مورفولوژيك و ايمونوسيتوشيمي ماهيت سلول‌هاي جدا شده به‌عنوان سلول‌هاي اندوتليال را تأييد نمود.
نتيجه‌گيري: يافته‌ها نشان داد كه مخلوط بهينه اكتينيدين و تريپسين اثرات سمي محسوسي بر سلول‌هاي جدا شده نداشته و گزينه‌اي مناسب و جديد براي جداسازي سلول‌هاي اندوتليال آئورت موش صحرايي است.

An optimized mixture of kiwifruit actinidin and trypsin for isolation and culture of endothelial cells from rat aorta
Article Type: ---- Unspecified ----
Abstract:

Background: Proteolytic enzymes, especially collagenases, are used for digestion of extracellular matrix, cell isolation and primary culture. Because of the problems in purification and low amount of collagenases in bacterial or animal sources, it is important to find new sources of the enzymes. So, in the present study actinidin, a plentiful protein in kiwifruit was purified and a mixture of actinidin and trypsin was applied to isolate rat aortic endothelial cells.
Methods: Aortic endothelial cells were isolated using digestion solution containing different concentrations of actinidin (from 2 to 16 mg/ml) and trypsin (0.3, 0.6, 1.2 and 2.4 mg/ml) in different times (from 15 to 90 minute). Isolated cells were cultured in DMEM culture medium. Isolated cells were identified by morphological characteristics and immunocytochemical staining; viability of separated cells was estimated by trypan blue exclusion test.
Results: Actinidin in concentration of 10 mg/ml with trypsin in concentration of 1.2 mg/ml for one hour could isolate rat aortic endothelial cells. In this condition the viability of cells was estimated 90%. Morphological and immunocytochemical charac-teristics confirmed the isolated cells as endothelial cells.
Conclusion: The results showed that the mentioned mixture of actinidin and trypsin has not considerable toxic effects on separated cells and is a novel and suitable option for isolation of rat aortic endothelial cells.

قیمت : 20,000 ريال