بررسي مولكولي فعاليت پروتئوليتيكي پروتئين 3C در پاراكو ويروس انساني تيپ يك

مجله علوم پزشكي رازي (مجله دانشگاه علوم پزشكي ايران سابق)

دوره 14 - شماره 55

نوع مقاله: ---- Unspecified ----
چكيده:

زمينه و هدف: پاراكوويروس‌هاي انساني، جزء خانواده پيكورنا ويروس‌ها مي‌باشند كه از نظر كلينيكي حائز اهميت هستند. اخيراً بررسي توالي ژنوم پاراكوويروس تيپ يك نشان داده است كه اين ويروس، از پيكورنا ويروس‌هاي ديگر متفاوت بوده و فاقد موتيفي است كه در فعاليت پروتئازي 2A دخالت دارد. هدف از انجام اين مطالعه، بررسي فعاليت پروتئوليتيكي پروتئين 3C در پاراكو ويروس انساني تيپ يك مي‌باشد.
روش بررسي: اين مطالعه از نوع بنيادي كاربردي مي‌باشد. ناحيه كد كننده پروتئين 3C از (cDNA(Complementary DNA تهيه شده از ژنوم پاراكو ويروس انساني تيپ يك، با آنزيم ليگاز در پلاسميد (pUBS(Expression plasmid vector وارد شد و پلاسميد نوتركيب pFG3(Plasmid Farideh Ghazi) تهيه گرديد. پس از انتقال پلاسميد و تكثير آن در باكتري E.coli MC10.22، به طريق استخراج با فنل، DNA جدا شد و سپس در سيستم پروكاريوتي(E.coli BL21) و روش درون لوله‌اي(In vitro)، تحت پروموتور T7 بيان گرديد. نتايج با (SDS-PAGE(Sodium dodecyl sulfate-Polyacrylamid gel electrophoresis بررسي شد.
يافته‌ها: با بررسي محصول بيان پلاسميد نوتركيب فاقد ژن 3C در هر دو سيستم پروكاريوتي و In vitro، فقط يك باند بزرگ در حدود 90 كيلو دالتون مشاهده گرديد. در صورتي كه وقتي محصول بيان پلاسميد نوتركيب حاوي 3C در هر دو سيستم توسط پلي‌آكريل آميد ژل بررسي شد، بجاي يك باند بزرگ، چندين باند كوچك مشاهده شد كه دلالت بر خاصيت پروتئازي پروتئين 3C مي‌كند. در ضمن وقتي آنتي‌پروتئاز به محصول پلاسميد حاوي ژن 3C اضافه گرديد، نتيجه، مشابه محصولات حاصل از بيان پلاسميد فاقد ژن 3C بود.
نتيجه‌گيري: نتايج نشان داد كه پاراكوويروس‌هاي انساني تيپ يك، از نظر فعاليت پروتئوليتيكي، متفاوت از ديگر پيكورنا ويروس‌ها مي‌باشند و در اين ويروس‌ها، فقط پروتئين 3C داراي خاصيت پروتئازي بوده و كليه كليواژهاي پلي پروتئين اوليه ويروس توسط اين پروتئاز انجام مي‌شود.

Molecular Analysis of Proteolytic Activity of 3C Protein in Human Parechovirus Type
Article Type: ---- Unspecified ----
Abstract:

Background & Aim: Human parechovirus is a genus of picornaviruses which includes a number of important viruses of clinical significance. Recent sequence analysis suggests that human parechovirus type 1(HPEV-1) is distinct from other picornaviruses and lacks the motives believed to be involved in the protease function of 2A. The aim of this study was to analyse proteolytic activity of 3C protein in human parechovirus type 1.
Materials and Method: The region of HPEV-1 cDNA that was coded for 3C protein was inserted into plasmid pUBS by Ligase enzyme and pFG3 recombinant plasmid was prepared. After transformation and replication of this plasmid in E.coli MC 10.22, DNA was isolated by phenol extraction and then expressed in prokaryotic(E.coli BL-21) and in vitro systems under T7 promoter. The results were detected by SDS-PAGE and analyzed.
Results: The products of expression of recombinant plasmid(not included 3C gene) in both prokaryotic and in vitro systems were analyzed. Just one large band(90 KD) was observed, but with plasmid including 3C gene, several small bands were detected. These results indicated proteolytic activity of 3C protein. After addition of anti protease to the products of plasmid with 3C gene the result was the same as the plasmid without 3C gene.
Conclusion: The results showed that HPEV-1 has a processing strategy different from other members of picornaviruses, and 3C protein seems to be the only virus encoded protease that can catalyze cleavages of all sites in the parechoviruses primery polyprotein.

قیمت : 20,000 ريال