بررسي خصوصيات پروتئين هاي شوك حرارتي در بروسلا آبورتوس و واكنش اين پروتئين ها با سرم افراد بيمار و كنترل

مجله دانشگاه علوم پزشكي بابل

دوره 9 - شماره 6

نوع مقاله: ---- Unspecified ----
چكيده:

سابقه‌ و هدف‌: وقتي بروسلاها در معرض افزايش درجه حرارت قرار مي گيرند پروتئين هاي شوك حرارتي (hsp ) (Heat shack proteen) سنتز مي كنند. بعضي از اين پروتئين ها در طول عفونت به شدت توسط سيستم ايمني ميزبان شناسايي مي شوند. هدف از اين مطالعه تعيين الگوي سنتز hsp در بروسلا آبورتوس تحت شوك هاي حرارتي مختلف و آنتي ژنسيته آنها در مقابل سرم افراد بيمار و سالم بوسيله ايمونو بلاتينگ مي باشد.
مواد و روشها: در يك كارآزمايي تجربي، 5 باكتري بروسلا آبورتوس از گاو جدا شده و تحت شوك هاي حرارتي در 39، 40 و42 درجه سلسيوس قرار گرفتند. سپس پروتئين هاي باكتري استخراج شده و الكترو‌فورز در ژل پلي‌اكريل‌آميد (SDS-PAGE) انجام گرفت و بدين ترتيب انواع پروتئين هاي شوك حرارتي، از جمله hsp60 بررسي شدند. در نهايت با استفاده از روش ايمونو بلات، آنتي ژنسيته پروتئين هاي شوك حرارتي (hsp60) در مقابل سرم افراد بيمار (مبتلا به تب مالت) و سالم مورد بررسي قرار گرفت.
يافته ها: درSDS-PAGE عمده ترين باندهاي پروتئيني درمحدوده وزني 75- 30 و 20-14 كيلودالتون قرار داشتند. درباكتري هاي شوك نديده درمحدوده 60 كيلودالتون باندي مشاهده گرديد (hsp60) كه مقدار آنها كم بود ولي درباكتري هاي شوك ديده مقدار توليد آنها افزايش چشمگيري داشته است. در واكنش پروتئين هاي پيكره اين باكتريها با سرم افراد بيمار در ايمونوبلاتينگ چندين باند پروتئيني ديده مي شود كه در واكنش با سرم افراد سالم ديده نمي شود. نكته قابل توجه در واكنش پروتئين هاي پيكره باكتري با سرم افراد بيمار وجود باند قوي تر در ناحيه 60 كيلو دالتوني در تمام نمونه هاست.
نتيجه‌گيري‌: باكتري بروسلا آبورتوس در مقابل شوك حرارتي، با توليد پروتئين هاي جديد و يا افزايش توليد بعضي از پروتئين ها (hsp60) پاسخ مي دهد. سرم مبتلايان به بيماري تب مالت بطور قابل توجهي با hspها از جمله hsp60 واكنش نشان مي دهد. اين نشان دهنده آنتي ژنيسيته پروتئين هاي شوك حرارتي به خصوص hsp60 مي باشد. نتايج اين مطالعه مي تواند زمينه مطالعات بعدي در استفاده احتمالي از hsp60 به عنوان نامزد آنتي ژني مناسب در طراحي كيت الايزا براي تشخيص بروسلوز و يا طراحي واكسن هاي زير واحد باشد .

CHARACTERIZATION OF HEAT SHOCK PROTEINS IN BRUCELLA ABORTUS AND INTERACTION OF THESE PROTEINS WITH PATIENT AND CONTROL SERA
Article Type: ---- Unspecified ----
Abstract:

BACKGROUND AND OBJECTIVE: The bacteria begin to synthesize heat shock proteins (hsp) when facing elevated temperatures. Some of the hsps recognized during infection by host immune system. The goal of this study was to determine the synthetic pattern of hsps in brucella abortus that were subjected to different heat shocks and antigenecity of hsps in both patient and healthy sera by immuno blot assay.
METHODS: In this experimental trial study, five brucella abortus were isolated from cows and were subjected to 39, 40, and 42ºC heat shocks. Then cell proteins were extracted and electrophoresis in polyacrylamide gels (SDS-PAGE) was performed. Finally antigenecity of hsps (hsp60) in healthy as well as patient sera were surveyed by immuno blot.
FINDINGS: The major protein groups were in the range of 30-75 and 14-20 KDa in SDS-PAGE. The amounts of a 60 KDa protein band (hsp60) was significantly enhanced following heat shock as compared to the unheated cells. The sera from brucella patients reacted with several of these cell derived protein bands in immuno blots, none of which were reactive with sera from healthy individuals. The 60 KDa band was the most significant and showed strong reactions with all brucellosis sera samples.
CONCLUSION: This study showed the brucella abortus produces heat shock proteins, especially hsp60, in response to heat shock. Brucellosis patient’s sera reacted strongly with these molecules. This observation points to the antigenecity properties of hsps, specially the overwhelming response to hsp-60. Therefore, probably the hsp60 can be an antigen candidate for ELISA test development as well as for engineering sub unit vaccine against brucella.