نقش اسيد رتينوئيك و بستر آستروسيت در تمايز سلول هاي بنيادي هيپوكامپ

پژوهش علوم سلامت و نظامي(مجله علمي پژوهشي دانشگاه علوم پزشكي ارتش جمهوري اسلامي ايران)

دوره 3 - شماره 9

نوع مقاله: ---- Unspecified ----
چكيده:

سابقه و هدف: سلولهاي بنيادي، سلولهايي چند استعدادي مي باشند كه از نواحي متفاوتي از بدن يك موجود زنده استخراج مي گردند. اين سلولها در محيط كشت با استفاده از فاكتورهاي متفاوت رشد و لايه تغذيه كننده سلولي قابليت تكثير و تمايز براي مدت زمان طولاني را دارا مي باشند. لايه تغذيه كننده سلولي آستروسيت كه با استفاده از فاكتور سيتوزين آرابينوزيد غيرفعال گرديده قابليت تمايز سلولهاي بنيادي كشت داده در سطح خود را به ديگر سلولها دارا مي باشد. هدف اصلي اين پژوهش تمايز سلولهاي بنيادي هيپوكامپ با استفاده از اين لايه مغذي و فاكتورهاي رشد اسيد رتينوئيك و ايزومر آن 9-RA cis به سلولهاي توليد كننده اپسين است.
مواد و روش ها: در اين تحقيق پايه از جنين 18 روزه موش نژاد اسپراگودالي استفاده شد. در روز 18 مادر سزارين و مغز جنين ها خارج گرديد. بلافاصله داخل محلول HBSS قرار داده شد. سپس با استفاده از روش Backer هيپوكامپ جدا شد و با روش Fishbach سلولهاي آن جدا گرديد. سلولهاي به دست آمده در داخل فلاسك 25cm2 كشت داده شد؛ بعد از 3 روز سلولها را با استفاده از تريپسين از كف فلاسك جدا و در دو مقدار يكي با دانسيته بالا 200000 و ديگري با دانسيته پايين 20000 سلول در داخل پليت 6 خانه، كشت داده شد منتها قبل از انتقال سلولها به پليتها كف رولهاي پليت را يك رديف Poly L lysin و رديف ديگر را با آستروسيتهاي غيرفعال پوشش داديم. مدت 4 روز سلولها در محيط كامل DMEM/F12 و 10FBS% نگهداري نموده و سپس به مدت 6 روز دوزهاي متفاوت ATRA و 9-RAcis به چاهكهاي پليتها اضافه گرديد. در پايان با استفاده از منوكلونال آنتي بادي ضد اپسين سلولها بررسي شدند.
يافته ها: بعد از 6 روز اضافه كردن فاكتورهاي فوق به سلولهاي موجود در هر چاهك پليت در دوز 100nM از 9-RAcis و 500nM از ATRA بيشترين سلولهاي تمايز يافته به دست آمد و در پليت هايي كه از بستر پلي ليزين به عنوان لايه مغذي استفاده شد تمايزي مشاهده نگرديد. همچنين تمايز در دانسيته بالاي سلولي بيشتر از دانسيته پايين بوده است.
نتيجه گيري: بستر آستروسيت و فاكتورهاي خارجي مانند ايزومرهاي اسيد رتينوئيك قابليت تمايز سلولهاي بنيادي هيپوكامپ به سلولهاي توليدكننده اپسين را دارا مي باشند.

Effects of Retinoic Acid and Astrocyte as a feeder layer in differentiation of Hippocampal stem cell
Article Type: ---- Unspecified ----
Abstract:

Background: Adult stem cells are pluripotent cells conventionally isolated from some part of body by different methods. From developmental stand point, murine neural stem cells represent an accessible and important system for studies of basic stem cell property such as self –renewal and multipotency.
Materials and methods: In this study hipocampal stem cells obtained from embryonic day 18 (E 18). Pregnant female rats were killed, embryos heads separate and then hippocampus isolated by the method of Banker, then their cells dissociated by the methods of Fishbach, and plated in flask 25 cm, after 3 days cells separated by tripsin, counted with trepan blue and hemocytometer, divided into two density (high 200000) and (low 20000 cells). Before transplantation of cells, six well plates coated with poly Llysine and inactivated astrocyte, Then isolated cells transplanted into 6 well plate for 4 days with medium DMEM/F12 supplemented with FBS 10%. After 4 days different doses of ARTA and RA cis-9 added per well for 6 days, and then immunocytochemistery were done.
Results: After 6 days of treatment with above factors, doses of 100 nM RA cis-9 and 500 nM ATRA have the more staining cells with monoclonal antibody. But in 100 nM RA cis-9, we saw maximum differentiated cells. All of differentiations were done on wells with inactivated layer in high and low density.
Conclusions: Inactivated astrocyte as a feeder layer and extrinsic factors such as All Transe Retinoic Acid (ATRA) and RA cis-9 can cause differentiation in hippocampal stem cells into photoreceptor like cell.

قیمت : 20,000 ريال