الگوي بازآرايي رده متقاطع ژن هاي گيرنده لنفوسيت T از نوع دلتا و گاما در كودكان ايراني مبتلا به لوسمي لنفوبلاستي حاد از نوع پيش سازهاي B با استفاده از واكنش زنجيره پليمراز

فصلنامه پژوهشي خون

دوره 2 - شماره 6

نوع مقاله: ---- Unspecified ----
چكيده:

سابقه و هدف: بازآرايي قطعات ژني درمسير تكاملي لنفوسيت‌ هاي B وT، تنوع زيادي در مولكول‌ هاي گيرنده لنفوسيت(T(TCR ايجاد مي‌كند. درلوسمي‌ هاي لنفوئيد ازنوع ALL، B-precursor علي ‌رغم انتظار بازآرايي رده متقاطع در ژن‌هاي TCR ايجاد مي‌گردد. هدف از مطالعه حاضر بررسي الگوي بازآرايي ژن‌هاي TCR (دلتاوگاما) در لوسمي لنفوبلاستي حاد (ALL) كودكان از نوع پيش سازهاي B توسط واكنش زنجيره پليمراز مي‌باشد.
مواد و روش ‌‌ها: درمطالعه آينده ‌نگرحاضر، 183 كودك باتشخيص اوليه لوسمي‌حاد، قبل ‌ازشروع درمان مورد بررسي قرارگرفتند. پس از ارزيابي مورفولوژي و ايمونوفنوتيپ، تنها 140 بيمار با تشخيص B-precursor ALL براي مطالعه انتخاب شدند. سلول‌هاي تك هسته‌اي كه بلاست ‌ها را نيز شامل مي‌شدند، با گراديان غلظتي جدا شدند. پس از استخراج DNA، آزمايش PCR به منظور تكثير منطقه بسيار متغير( TCR-δ (Dδ2-Dδ3, Vδ2-Dδ3 و (TCR-γ (V γ I، V γ II، V γ با استفاده از پرايمرهاي مشترك انجام شد. محصولات PCR پس از تجزيه هترودوپلكس و الكتروفورز برروي ژل پلي ‌آكريل ‌اميد و رنگ ‌آميزي نقره مورد بررسي قرار گرفته و پس از تعيين توالي جهت تاييد با توالي ‌هاي مشابه در بانك ژني مقايسه شد. آناليز آماري با نرم‌افزار SPSS و آزمون t، Mann whitney و كاي ‌دو (Chi-square) انجام شد.
يافته‌‌‌ ها: بازآرايي كلونال TCR- γ شامل V γ I / V γ II وV γ به ترتيب در9/ 64% و3/ 79% از بيماران وجود داشت (باي كلونال : 5%). بازآرايي V γ II شايع ‌ترين نوع (8/ 46%)بود.47(2/ 45%) و11(6/ 16%) نفر از بيماران به ترتيب داراي بازآراييVδ2-Dδ3و(27.7%اي ‌كلونال، 3 /4% اليگوكلونال) و Dδ2-Dδ3 (يك بيمار با الگوي باي ‌كلونال) بودند.
نتيجه گيري: الگوي كلونال ژن IgH و (TCR-δ (Dδ2-Dδ3 ,Vδ2-Dδ3 مشابه جوامع ديگر بود.فراواني بازآرايي(TCR-γ (V γ II,V γ I قدري بيش از گزارش ‌هاي قبلي بوده و برخلاف بقيه گزارش‌ ها به استثنا گزارشي از برزيل، V γ II شايع‌ ترين بازآرايي را داشت.هيچ ارتباط معني داري بين انواع مختلف بازآرايي و متغيرهاي كمي وجود نداشت و تنها نكته جالب، كاهش بروز Vδ2-Dδ3 با افزايش سن (بيشتراز 2 سال) بود. با توجه به نتايج حاصل مي‌توان از اين شاخص ‌ها در تشخيص كلوناليتي و ارزيابي حداقل بيماري باقي‌مانده استفاده كرد.

The pattern of cross lineage T-cell receptor ?/? gene rearrangements in B-precursor acute lymphoblastic leukemia of Iranian children using polymerase chain reaction
Article Type: ---- Unspecified ----
Abstract:

Background and Objectives :Diversity in heavy chain immunoglobulin (IgH) and T-cell receptor (TCR) molecules occurs during B- and T-lymphocyte differentiation through the rearrangement of variable (V), diversity (D), junction (J) and constant (C) gene segments. Lymphoid leukemia cells are similar to normal precursors and have rearranged IgH, Igк and TCR (cross-lineage rearrangement) genes which can be used as a marker of clonality and evaluation of minimal residual disease (MRD). The purpose of this study is to evaluate the pattern of TCR- δ/γ – gene rearrangements using Polymerase Chain Reaction (PCR) in B-precursor acute lymphoblastic l eukemia (ALL) in Iranian children.
Materials and Methods :In our prospective study, bone marrow aspirates of 183 children with early diagnosis of acute leukemia were collected at admission before any chemotherapy. After reviewing cytomorphology and immunophenotyping, only 140 subjects with diagnosis of B-precursor ALLs were selected for study. Sixteen were excluded from our study due to various reasons including cellular degeneration. Mononuclear cells including leukemic blasts were isolated by density gradient. After DNA extraction, hyper-variable regions TCR-δ (Vδ2-Dδ3 and Dδ2- Dδ3 and TCR - γ (V γ ;V γ I V γ II) were amplified by consensus primers using PCR. PCR products were analyzed after heteroduplex analysis and polyacrylamide gel electrophoresis (silver stain). The DNA sequences were then compared and aligned to the homologous sequences of Gene Bank for confirmation. T-test, Mann whitney, Fisher exact test and Chi-square were used for data analysis.
Results:Clonal rearrangement of TCR -γ (V γ) and V γI/II were present in 79.3% and 64.9% of patients respectively and only 5% of cases showed biclonal pattern. The V γ II rearrangement was the most common (46.8%) type in TCR- γ. 47 (45.2%) and 11 (16.6%) of patients had Vδ2- Dδ3
and Dδ2– Dδ3partial gene rearrangements, respectively. Biclonal/oligoclonal patterns were present respectively in 27.7% and 4.3% of cases with Vδ2-Dδ3 rearrangement. Only one patient had biclonal Dδ2- Dδ3 rearrangement.
Conclusions:Clonal rearrangement of TCR-δ (Vδ2-Dδ3 and Dδ2- Dδ3) genes had a pattern similar to other populations. Frequency of TCR- γ (V γ I and V γ II) rearrangements was slightly higher than previous reports, and in contrary to others except for Brazilian report the V γII rearrangement was the most common type. We found no significant correlation between presence of different types of rearrangements and quantitative variables. The only significant point was the reduction of V+2D+3 with increase in age . According to preliminary results, these clonal markers can be used in diagnosis and follow up of MRD.

قیمت : 20,000 ريال