بررسي قدرت روش PCR در تشخيص مايكوباكتريوم توبركولوزيس بر روي بلوك هاي پارافيني بيوپسي هاي كوچك با استفاده از دو پرايمر IS6110 و آنتي ژن 38KD

فصلنامه پژوهشي پژوهنده

دوره 6 - شماره 21

نوع مقاله: ---- Unspecified ----
چكيده:

سابقه و هدف: با توجه به شيوع عفونت مايكوباكتريايي و طولاني بودن روشهاي معمول تشخيص بيماري سل و عدم گزارش تجربه اي از PCR در بلوكهاي پارافيني در كشور و به منظور تعيين قدرت PCR در تشخيص مايكوباكتريوم توبركلوزيس در بلوكهاي پارافيني بافتهاي فيكس شده در فرمالين، اين تحقيق در سال 1378 در مركز آموزشي، پژوهشي و درماني سل و بيماريهاي ريوي انجام شده است. مواد و روشها: تحقيق به روش تجربي از نوع تشخيصي دوسوكور روي 71 بيوپسي برونش، TBLB و بيوپسي پلور به قطر متوسط 0.3 سانتي متر، فيكس شده در فرمالين و بلوك شده در پارافين انجام شده است. ابتدا برشهاي نازك از بلوكهاي پارافيني تهيه و سپس DNA به روش استاندارد استخراج و PCR با پروتوكل استاندارد و با استفاده از دو پرايمر38KD و IS6110 انجام گرفت. ميزان حساسيت، اختصاصيت و ارزش پيشگويي مثبت و منفي تعيين گرديد. يافته ها: گروه اول شامل 29 مورد بيوپسي بيماراني كه سل آنها از طريق جواب كشت مثبت خلط، BAL يا مايع پلور تشخيص داده شده بود. گروه دوم شامل 14 مورد بيوپسي بيماراني كه سل آنها از طريق جواب مثبت به درمان ثابت شده بود. گروه كنترل شامل 28 مورد بيوپسي در بيماراني كه به دليلي غير از بيماري سل از آنها بيوپسي به عمل آمده و جواب بيوپسي آنها بدخيمي گزارش شده است. در مجموع از 43 مورد بيوپسي برونش، TBLB و يا بيوپسي پلور در بيماران سلي كه تشخيص سل آنها براساس كشت مثبت يا پاسخ به درمان ضد سلي بوده است، 33 مورد جواب مثبت با پرايمر (IS6110 (PCR II و 34 مورد جواب مثبت با پرايمر (38KD (PCR I به دست آمد، 10 مورد جواب منفي با PCR II و 9 مورد جواب منفي با PCR I حاصل شد. از 28 مورد كنترل منفي، 3 مورد مثبت كاذب بدست آمد. نتيجه گيري و توصيه ها: مطالعه فوق نشان داد كه انجام PCR بر روي بلوك پارافيني داراي حساسيت 76 تا 79% و اختصاصيت 89 تا 92.8% بر حسب نوع پرايمر مي باشد. ارزش پيشگويي مثبت PCR روي بلوك پارافيني 91 تا 94% و ارزش پيشگويي منفي 72 تا 73% مي باشد.

كلمات كليدي: PCR ، IS6110 ، بلوك پارافيني
Surveying the efficacy of PCR method in detection of Mycobacterium Tuberculosis in paraffin section of small biopsy specimens with the use of IS 6110 and 38 KD antigen
Article Type: ---- Unspecified ----
Abstract:

Background: Regrading the prevalence of mycobacterial infection and delay in diagnosis of tuberculosis and also with respect to the lack of reports considering PCR in paraffin sections in our country, this study has been carried out to determine the efficacy of PCR in detection of Mycobacterium Tuberculosis in formalin-fixed and paraffin-embedded tissue in NRITLD (National Research Institute of Tuberculosis and Long Disease), 1999. Materials and methods: This experimental double-blinded study has been performed on 71 formalin-fixed and paraffin-embedded specimens of bronchial biopsies, TBLB, and pleural biopsies with mean diameter of 0.3cm. Tiny sections have been prepared and standard DNA analysis and PCR protocol has been carried out using IS 6110 and 38KD antigen. Specificity, sensitivity, and positive and negative predictive value wee determined. Results: Group I composed of 29 biopsied specimens of patients who were definitely diagnosed with tuberculosis according to positive sputum culture, BAL or pleural tap. Group II composed of 14 biopsied specimens of patients who had established tuberculosis according to the positive response to drug therapy and group III including 28 biopsied specimens of non-tuberculous patients reported to have other malignancies. Finally, among 43 specimens of bronchial biopsies, TBLB or pleural biopsies who had definite diagnosis of tuberculosis according to positive culture of drug response, 33 had positive response to IS 6110 (PCR II) and 34 had positive response to 38KD antigen (PCR I). 10 and 9 negative response had been seen with PCR II and I, respectively. Among 28 negative controls 3 false positive has been reported. Conclusion: Results have implied that PCR in paraffin sections has sensitivity of 76-79% and specificity of 89-92.8% according to the primer type. Meanwhile, PCR has positive predictive value of 91-94% and negative predictive value of 72-73%.