جداسازي و تخليص آلفا 1-مهاركننده پروتئيناز از منبع انساني و تعيين برخي خصوصيات فيزيكوشيميايي آن

مجله علوم پزشكي مدرس

دوره 7 - شماره 2

نوع مقاله: ---- Unspecified ----
چكيده:

هدف: مطالعه حاضر روش تخليص آلفا-1- مهار كننده پروتئيناز از منبع غني شده خمير IV-1 كوهن را با حذف مراحل پيچيده و مواد شيميايي گران قيمت در شرايط ساده و مقرون به صرفه و سريع توضيح مي دهد.
مواد و روشها: ابتدا A1PI با دو مرحله رسوبگيري به وسيله پلي اتيلن گليكول از ساير پروتئينهاي موجود درمنبع اوليه(خمير IV-1 استخراج و سپس با استفاده از كروماتوگرافي تعويض يون روي ژل DEAE-سفاروز CL6B پروتئين با درجه خلوص بالاتر جداسازي و تخليص شد. ويروس زدايي محصول به روش پاستوريزاسيون (انكوباسيون ° 60 سانتي گراد و 10 ساعت) بدون تغيير فاحش در فعاليت بيولوژيكي پروتئين آن انجام شد. محصول نهايي به وسيله روش اولترافيلتراسيون تغليظ و سپس به صورت ليوفيليزه نگهداري شد. براي تعيين فعاليت پروتئين از ظرفيت مهاري تريپسين (TIC) استفاده شد. ميزان A1PI محصول با روش ايمونوديفيوژن شعاعي (SRID) تعيين شد.
نتايج:در اين فرايند راندمان 60% و درجه خلوص A1PI ايزوله شده 62/0 و وزن ملكولي آن با استفاده از روش SDS-PAGE در حدود D54000 تخمين زده شد. همچنين براي مشاهده دقيقتر درجه خلوص و تاييد خاصيت آنتي ژنيك (ايمونوراكتيويته) از روش ايمونوالكتروفورز درمقابل آنتي بادي تام انساني و آنتي بادي اختصاصي برعليه A1PI استفاده شد.
نتيجه گيري: نتايج فوق بيانگر تخليصA1PI با درجه خلوص 62% مي باشد، همچنين بررسي A1PI و تريپسين حاكي از آن بود كه µg 1.5-2 از اين پروتئين توانايي مهار 1µg تريپسين را داشت بنابراين هم درجه خلوص و هم خاصيت مهار كنندگي A1PI تخليص شده با نوع تجاري قابل مقايسه است.

Purification and isolation of Alpha-1-Proteinase inhibitor and determination of some of its physicochemical properties
Article Type: ---- Unspecified ----
Abstract:

Purpose: We used a method to prepare the alpha-1-proteinase inhibitor (AlPI) from the enriched Chon IV-1 paste, without complex steps and expensive chemical materials in a simple condition. The purification and isolation of the A1PI from human plasma and the determination of some of its physicochemical properties were the aims of this study.
Material and Methods: Firstly, the A1PI was separated from other proteins in the IV-1 paste by two times precipitation by the polyethylene glycol. Secondly, using the ion exchange chromatography on the DEAE-Sepharose–CL6B gel the A1PI was obtained with a higher purity. The virus inactivation by the pasteurization at 60°C for 10 hours was carried out without any significant changes in the biological activity. The final product was concentrated by the ultra-filteration and lyophilized. The activity of the A1PI was determined based on its’ trypsin inhibitory capacity (TIC). The single-radial immuno-diffusion (SRID) was also carried out to estimate the amount of the A1PI.
Results: The results showed an A1PI purity of 0.62 with a 60 percent yield with a molecular weight determined to be about 54000 Dalton by the SDS-PAGE. For a more precise calculation of the degree of purity and confirming the antigenic property, the immuno-electrophoresis method was used against the human antiserum and the specific antiserum of the A1PI.
Conclusion: Stoichiometric studies between the A1PI and trypsin showed that an amount of 1.5 to 2 µg of this protein is able to inhibit 1 µg of trypsin. The inhibitory properly of the purified A1PI was comparable with the commercial product used in this regard.

قیمت : 20,000 ريال